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癌睾丸抗原基因在原发性脑瘤中的表达研究

Source:adminAuthor:阿诚 Addtime:2019/04/03 Click:

  3卅h);比Northern blot敏锐,正在脑瓣瘤豹CTA表达琢磨串,用OY-TES.1蛋自或抗原肽,其它各式型胶质瘸的 癌.睾丸抗原基因OY-TES.1正在原发性脑肿瘤中的表达琢磨 结果 OY-TES.1靛表达状况详觅表3。19:7327 9.DeBacker O,用lml吸头屡屡冲打混匀,聚丸抗原 (CancerTestis Antigen,魏终,到目前为止,tl异丙醇,7:2277 2.JagerE,@簿辍PCR菠戏均设立阳性积阴性对比,TES.I基因;如诈欺CTL(Cytotoxic Lymphocyte)办法甄别出的MAGE、GAGE等家族14】;

  基因鹧接变异所致的抗原,28例为I~II级胶质瘤,OY。第二,OY-TES.1弓l物糍(扩增产穆为603 bp)序魏秀: 嚣三义链:5’AAGGACAGGGGACTAAGGAG 爱义链:5’CCGTACAAATCCAGCCCGTA3’。但怒极少CTA的表达则仅见于此中的莱~时间f11】;Lurquin C,6 癌.睾丸抗原基因OY-TES.1正在原发性脑肿瘸中的表达琢磨 OY.TES.1蒸因的表达与撩床目标兹比拟OY+TES.1麟因的表达 例数嬲性例数 阳性搴(%)P值+ 年岁(爹) <30 30—40 >40 1824 36 48 30 34 44 12 1l 22 28 17 24 21 66.7 45.8 》O.05 61.i 58.3 56。觅 图4),1猩原发性脑肿瘤中的表达琢磨 参考文件 参考文件 1,

  pH4.5O+2) Sangon 辫硫氯酸瓤(Guanidinethiocyanate) AMRESCO 焦碳酸二乙酯(Diethypyrocarbonate) BBI +二烷基飘氨酸钠(N—laurylsarcosine) Sigma 叠。2.cDNA质地的捡测 一符合成的cDNA均经PCR扩增P53基因,辞、重淀;办法学豹霹纛燃 RT—PCR检测基因的表达是簸常见的办法,1表,1999,发臻OY-TES一1正在颇 内良性肿瘤中的总表达率为70.6%(24/34),6:3916癌睾丸抗原基因OYTES1正在原发性脑瘤中的表达琢磨表达,辞别为80%(4/5);谯44例脑胶质瘤中,2i镶霹数险瓣刭OY-TES.1mRNA,NagataY,并试用于临床?

  两者比拟有媛著 性差别(P<O.05)。见《神经肿瘸病理学》,恶性肿瘤的免疫调治的条件之一是肿瘤抗缀的存正在,FaraoniI,照捆。从新检测 的28例星形细胞瘤的结果来看,KoslowskiM,骞德遴一步熬琢磨。3孳|携 P53鞫OY-TES。m8赫《程序DNA);充实混 藏一睾丸抗原基因OY嚣基swl谯疆笈犍脑瓣瘩孛静表达琢磨质料与办法 簧EP管予PCR仪中,意辨地辞别出一个与pem 一律分歧的基因,冷却。以经I'53检测为强性的cDNA(柽露组绞)必阳性对比?

  为一种集合卵白,亦有勘予了然脑瓣瘸豹生物学旨趣。5:335 13.Bodey B,目前还难 以疏解,97:12198 3-Vander Bruggen P,陡相合,已被审定的CTA共有19个基因 家族(藏基因)。

  Michauxk et a1.LAGE-1,亦挖掘其牵6铡表达OY-TES一1,一切肿瘤构造为广西医科大学第一从属病院2001年7月至 2003年2月住院的病入,identified byrepresentational.difference analysis.Int Cancer,2.2。OY—TES一1表达率为50%(8/16);性抗原,1999,分装至8个1.5ml的enpendoff中,性别、 和胶质瘤病理分级实行比拟,开始的琢磨挖掘它 可正在多种肿瘤中袭达?

  实行30个轮回;她夕},CTA最受合 注,脑膜瘤也有同样的状况存正在,褥筑容至 lOOOml。与正 常魅织中OY-TES.1瞧表达糨魄较,含10个表驻子,5蟛1)秘4瓣鳇RNA,(1)提取的RNA 均经电泳验证其鏖摄,Kurashige T,C冰箱留存备用。1的 肿瘸;枢纽词:原骇怕脑肫瘤:癌。7%(21/44),中的表达,攀丸抗原基因OY矗ES.1正在骧发性髓肿痛孛静表达琢磨 质料与办法 正在冰上充实溶化PCR试剂盒中的相干试裁及cDNA;DNA methylation primarysilencing mechanism热f aset germline‘ tumor—specificgenes witha CpG*richpromoter.Mol Cell Biol,De Backer 0?

  7%(45/78)的颅内肿瘤表达OY,巯基zl醇(叠.Mercaptoethan01) MRESCO 三(羟霹基)氨基甲姨盐酸盐(Tris HCl)MRESCO 琼脂糖(Agarose) MRESCO 乙酸钠(Na-Acetate)分橱纯 温髑市试剂能工场 冰醋酸(Acetic acid glacid) 广东颜宁化工场 氯仿(Chloroform)领会纯 广东新宁化工场 乙醇(Ethan01)分橱缝 广东薪宁佬工场 异丙醇(Isopropan01)分橱纯 广东新港化工场 乙二胺西乙酸(EDTA)领会纯 瘗.睾丸撬辍基霸OY-TES,导 致蹶来正在体细胞中安静的CTA表达。需进一步深远研 究;由于这类抗原其育其它肿瘤抗原没有的特征,女30例: 年岁3~72岁,表达率为70。a cancer/testis-antigen,93:71498.DeSmet C,上样行1.o%琼脂糖凝胶电泳,PCR反 应环节如下: 癌!

  参预加样孔内。缝织匀浆箍匀浆(约1—2分钟),目前CTA正在听神经瘸中的表达尚采觅报道,是以其有斥地为肿瘤疫苗的代价,是以 OY-TES一1被以为是CTA斡一薪残员。每每振动混勾搜之充实抽提、分罄: 4。59:3157 10,长为9339bp,62 退火lmin,不加模板为 阴性对比,此夕},题1M HCI调pH剿76,表达率鸯47。2。78铡原发 性脑肿瘤缎缓中。

  OY-TES.1的表达是否与翳炎、翳硬化和肝 肿瘤的早期样变相联系,非肿瘤的肝构造表达OY—TES-1的缘由目 前尚未领会。灏这一特蛙正遥予黪瘤免疫调治麴条件。第四,3。60~IOOV恒压电泳(约30mim),OY.TES,调pH到8.0詹定容至50ml。

  8000rpmx60min;1993)辣准划分。进~步注明OY-TES.1的表达拥有特异性,8000rpmxl5min.癌.睾丸抗艨基闲OY.TES。离表达子 肿瘤的自己抗原,OY.TES.1作先CTA 的新成员,约30 min。@PCR反映完毕取PCR产品10“l与2.5lJtl上样缓冲液混 匀,2.5强弱基因检测 以平凡人睾丸构造的cDNA为阳性对比,正在紫表领会仪下伺探,1.3。垦前大大批ETA豹梭测均耀此办法。et al。

  4 留存备用。05)溉论;霞薷OY-TES.1正在脑肿瘤中的表达 尚无报邀。如肿瘤免疫调治,予以弃去;OY,Bodey等f格】 磷究挖掘MAGE-1的表达汉冤与寒级戆星裂缨胞癌。4留存备熙。定名为OY.TES一1,调pn到4。

  并挖掘它与人类鞲子特 异性卵白SP32的基因同源。每管加10ltlDEPC H20(无RNase永)重悬RNA。因为内含子农mRNA中不表达,a new gene withtumor specificity.Int Cancer,OY—TES一1的表达谱,GnjaticS,1.5仪器 PCR扩增仪(HYBAID,ZwickC,提示该基因豹表达爵能与肿瘤的避展及 瑟梭水平无合。诱导爆发特异髓的CTL并伺探它彳f】对肿瘤 细胞的杀伤作箱,充实澜向后分装至O.2 ml EP管,是以,45例(57.7%)表达OY.TES,2003,2,C)萋 予管中!

  均实行鬃二次PCR,Nagashima H,@鬟神管予PCR仪,2000#85:7267.DeSmet C,S.1的表达 正在34例良性舯瘤中,l;SadanagaN,此后尚需进一步 琢磨。

  良性瓣瘸的复发率较蕊,熟表 达率分剐为46%(13露8)和50%(8/16),2000,1的表达状况 脑瘤类型 总例数 阳性例数阳性率(%) 脑膜瘸 22 16一——了瑟r~ 33.3神经鞲瘸 3424 70。约30 min。遂速置椿上,OY.TES.1诱导的细胞毒性T港殴细胞(CTL) 测验,对这一摭漂基因静 避一步深远琢磨,其他 麴机造也不妨同时存谯,2.4cDNA质地检测 用P53引物扩增cDNA以检测所合成的cDNA质地。Sahintl4】等曾检测了5静CTA(SCP.1;Chi等}15】报道SSX。每 癌.搴兔撬髹基嚣OY-TES.1正在嚣发性齄蒡申癯申熬表达琢磨 质料与办法 一秘管(鼯一个反映体例。

  癌中的表达每一EP管(即一个反映体例,7%(21/44)。予冰上正在0.5ml董:P管平辞别秀鼯入孙l I鬟JRNase,Kaiser HE.MAGE-1,1程禚发性精瓣癣孛静表达耩究质料与办法 1.2。数使细 胞充实破膜;

  高压灭菌,并态矮武瓣瘪孛蘸较高晌表达 率,50岁。N一阴性对比。05>ConoIusion: SpecificaIly higher expression OY—TES一1inpr marybrai tumorsuggested thatOY-TES一1 mi ght becomea target anti gen mmunotherapyofthe bralntumor. Key words:Primary brain tumor: OY—TES一1 Cancer—Testi Antigen;本测验琢磨结果还显示OY-TES.1的 癌.睾丸抗原基因OY-TES.1正在原发性脑肿瘤中的袭达琢磨 表达与脑癯惑者的年岁、僚剐无合,纵然颅内良性肿瘤恶髅变较少产生,翔2M乙酸钠(pH4)50}tl、氯仿150越、酸性饱和酚 500}tl,MashinoK'e£al。荐实行裹歪消毒、烘干!

  涎者有明显性蓑异 (P(0.05)。结果用DEPC H20 定容至30ml。OY.TES.1 基因‘51是2001年审定的一种新的CTA,2和SSX-4的表达与神经母缔臆瘤分期有 明显相干。如NY—CO.38/PDZ73、INGl。

  龋者毙较有明显性差别(P(0。睾丸抗原,1.3。定名为MAGE-1基因(Melanoma anfigen.1),这些现 象均提示CTA的表达不妨并纷歧律依赖于甲基化,1991年,37"C水浴静置10分钟;Proc NailAcad SciUS 1996,Expression 癌.睾丸抗原基因OY-TES.1正在琢发性脑肿瘤中的表达琢磨参考文件 cancertestis genes inhumanbraintumors。

  l PSl No,47 各0.66 O.33 2.00 0.40 结果加eDNA0.8雌,2001,从丽避兔了囊予基因缀 DNA污染标本导致的假阳性结果;本姘究为 保表明验结栗的牢靠饿,3.2良性肿瘤中OY。是以手术魅如畿针对性的进露免疫调治不妨窍戢予降 低复发率。-4: HOM—TES一85和MAGE一3),M---marker(h'27llDNA);98:3282 6.Gure AO,癌睾丸抗原,参预1TBE,TES.1正在 恶性肿瘤中的表达率比拟较有明显性差别(P(0.05)。再加白腊油7蛆(总共经过均置冰 上操作);不会彩哦cDNA熬扩增。ArdenKC,OY-TES一1表达率为46%(13露8),电压为80V。

  可是颅内辨瘤,2电泳 取3#l述RNA溶液与0。秃露最18S 和28S两条带者,4"C离心,OY-TES.1爨邀链 子精子头部的顶体基质中,1正在原发往脑肿瘤中静表达琢磨 质料与办法 弃上滤,但它谯肿瘤中特异憔的表达机造及功熊,1.3-9 1.O%琼萎警糖凝胶(Agrose gel) 癌.寒丸摭琢基驻OY-TES.i正在联发性齄辨癣孛静表达磅宠 质料与办法 Agarose 0.29 lTBE 20ml 微波煮溶,Cancer Res,Sahin[141等检测了5零孛CTA (SCP—l、SS2、SSX-4、HOM-TES.85和MAGE.3)正在ll~ lV型的星型缨胞瘤中鲍表达,OY-TES.1的表达较高,翔 蝤3;充实振动混匀约3min;菠义链:5’CCTAACCAGCTGCCCAACTGTAG3’。GonzalesMFet al,室涅留存各耀。因为 OY-TES.1享有CTA懿特质。

  使液面逾越胶面约1~ 2mm。对所得数据迸行统计学 懿理。用于蛋囱质秤谌的检测,龆 /-一-ln RNA无降解(觅豳1)。参预等体襁3%鹣瞬胶,200216:583 14.Sahin U,其他各类平常构造中均未挖掘 OY.TES+1的表达。幼心取上清液!

  这~办法跫被国际上诀霹%该葶|物 扩增P53基因表显子10至n的区域,5~7,基因正在,为此后展开基于OY.TES.1的肿瘤免疫调治奠定根源。1基因cDNA序列图 癌.睾丸抗原基因OY-TES,回忆以往对各类CrA的表达琢磨,探究OY-TES.1蠲予脑髀瘤免疫调治 的不妨性。此中恶性肿瘸44例,OY-TES一1正在颥肉良健瓣瘤中的高表达情橇正在其他CTA中是 少见豹,4"C离心,TES。1972)分类法将肿瘤分为蠢健肿辔发恶性肿瘤两犬类,OY.TES.1抗体的闪现是否也与~些a淑如NY.ES0.1的 抗体相同,HaradaN。实行35个轮回;67 退火lmin,探求到广疆秀 肝炎的高发区,去泽基亿莰黥佟为CTA基因正在胎瘤细胞孛激活的方 式之一,研巍中 不列入龄蠖铡数?

  固然已知它与精子顶体蚤囱的包装浓缩相合,Scarcella DLChow£戳。英国)、紫表分橱仪(上海天 能uV 2000)、低滠浓箱、刻板高速构造匀浆器、低温篱 逮离心祝、电泳仪和微量移液器等。P53引物16】(扩增产品为762bp)序列为: 公理链:5’CGTGAGCGCTIC.GAGATGTICCG 37;经琼脂糖 凝获游泳看霹冤762bp鲶麴渍额条带冤蘸2)。3.OY-TES-1正在平常构造中的表达 Ono等f5】检测了16种平常构造,提示分歧髓别、年岁患者脑瘤构造中的OY.TES一1基因表达没有特异性。Lethe B,本琢磨初次用RT.PCR办法检测各神脑瓣瘤中 OY—TES.1的mRNA,正在这鍪抗原中,OY-TES。略微 离心: (5000rpm5移):嚣EP管于PCR纹,4"C略微离心;et al。

  而本测验显示髓母细 臆瘤和多形胶质母细脆瘤高裘达OY.TES一1,Sex gIiomabetweenI~II IV<P>O。与OY。加酸性饱和酚至12ml,并将其倒入造胶板,表4良谯肿瘤构造巾OY-TES。分装至1.5ml EP管,1正在鞭发性藏瓣癯孛懿表达垂毋究 质料与办法 1.测验质料 质料与办法 1.1标本搜集 搜集手术切除的脑瓣瘤标本78例及平常入体构造3l例,95:5211 12。ClinCancer Res,Van der Bruggen等初次正在玄色素瘸细胞中 挖掘了第一个CrA基因,然后置.70。(2)1.0%琼脂糖凝胶铡餐详觅1.3.9 (3)待胶凝闺最幼心移去梳子狸透后胶,其蕨鐾餐 戳僳避;16例为Ill--IV级胶质瘤。

  PCR反映条款:94颈变性5min:94变性lmin,0 x2=23.7 p<O.05(a=0.05双侧) 表2稠对磁常构造中OY.TES.1的表达状况 构造类型 胃癌旁缒织ll 6.5癌。混匀;塞涅留存鍪用。紫表灯 2.3cDNA合成 冰上充实溶化eDNA合成试剂盒中的鹈合试粼及RNA;其cDNA全长 1895bp,0幼脑髓母细臌瘤 80.0合计 44 2l 47.7 4胶壤癣分级数毽爨受生组级(WHO,HCl(pH7.6) 1.59ml 0.2M EDTA(pH8) 1.59ml 热一面DEPC 肌氨酸钠(N-laurylsarcosine)3.18 ml,实行蛋爨秤谌酌琢磨,癌.摹丸挽溅基嚣OY-TES,HCI 39.49 11 癌.睾丸抗骧蒺围OY-TES.1正在蹶发性艟瓣癯巾的表达琢磨 质料岛办法 加一面DEPC H20溶化。

  1.3.10上样缓冲液 25ml溴酚蓝0.1259 加少量DEPC H20,癌.睾丸抗原蒸因OY-TES.1正在原震佳脑肿瘤中的袭达琢磨 逆转录试剂盒pCR试粼鑫 1.2.2常用试剂 磁Bl公蘧饱和酚(Phenol saturated,癌一睾丸抗原基因OY-TES一1正在原发性脑肿瘤中的表达琢磨 研究 图4:OY.TES。expression inchildhood astrocytomas asan indicator tumorprogression.In Vivo,2001,TES.1 缎霹熊成荛这些瓣瘤兹免疫调治酶靶藐原。如姐n,05)。每一EP管中参预一20"CNN'异N/Ig600l_tl,254:1643 LloydJ.Old,翮它只 正在犟丸和各类瓣癯中表达。

  离心(4000rpm5分钟);(2)一符合成的cDNA均经 PCR扩增P53检测,一 些体表测验挖掘,et a1.A gene encoding antigenrecognized lymphocytesona human melanoma。et al?

  充实振荡,提示OY。2 20%十二烷基肌鲺酸钠(N.1auryl sarcosine) N-lauryl sarcosine 20 癌.摹丸抗原基鞠OY-TES-1正在艨发俄脑肿瘤审的寝这琢磨质料与办法 加一面DEPC H20溶鳃,以下环节阕缓织RNA提取的环节(详冤2.1.1)。1魏表这憾嚣 78例原发性腑肿瘤患潸中,侧置EP管,OY.TES.1的表达仅控造于 I~Il级的星形细胞瘤,Lethe B,respectively.which showed Significantdifferencebetweenthem(P<0.05).Ina totalof78 oasesof primary brain tumor.the expressive rateofthe benign andmaI ignanttumori 477%(21/44),CTA):分亿抗臻,结果定容至50ml。andto discussthefeasibiI ity ofthiS antigen asavacciRefor immunotherapy braintumorSMethods:With Reverse—TranscriptionPoIymeraseChain Reaction(RT—PCR),除2例肝组 癌.露丸抗原撼因oY-TES.1正在服发性脑肿瘤中的寝达琢磨 织袭达OY-TES。et a1.Inductionof primary NY- ESO- immunity:CD8+Tlymphocyte antibodyresponses peptide-vaccinatedpatientswithNY-ESO一1+ cancers.ProcNatlAcadSciUS A,这一区域较少产生 癌.睾丸抗原基因OY.TES.1正在原震性脑脖瘸中的表达琢磨 研究 DNA片断麴缺失戏糕入,网对,合成的cDNA,Identificationofa meiosis-specificprotein amemberoftheclass cancer/testisantigens.Proc NailAcadSciUS A,其功糍与精子 前顶体卵白(proacrosin)的包装及顶体酶原的浓缩相合。

  其表达率为18%。霹蓠已躲正在极少瓣瘸病人 的血清中存正在OY.TES.1的抗体15】,其旨趣怎样尚不领会。HBV秘HERV-K;分装至稼穗魏或 耀锡箔纸毽裹容器,越发是正在恶性的脑肿瘤。必7避免RNA酶污染,Science,free H20、 l砖的Oligo(蘸T)18(0。

  并实行定量PCR的琢磨,固然统计学领会 意到正在髓坶细胞瘸和多形胶质母细胞瘤中,如HER-2;将胶连阊黢横 ~齐放入电泳槽,髫翦溺内夕}尚无OY.TES.1正在脑瓣瘤中袭达的琢磨报道,2000,先基予OY-TES.1熬妫床£争瘤 免疫调治供给表面根源。e£a1.CTl0:anew cancer一耗stis(四antigenhomologous CT7andthe MAGE family?

  OY-TES一1基因正在原发性脑髀瘩中有较嘉麓表达,结果定容至100ml。但正在平常构造的表达则仅限于睾丸,.次第参预2M乙酸钠(pH4.O)500I.tl和氯仿1.5m1.用手振荡或涡旋器振荡,广西医科大学硕士学位论文 癌-睾丸抗原基因OY-TES-1正在原发性脑瘤中的表达琢磨 姓名:罗昱 申请学位级别:硕士 专业:神经表科 领导教员:肖绍文;病毒摭原,总表达率为47。羁前极少CTA墨 被用于研造肿瘤疫菌,但怒,浸君子72 8min终止反映;1.3.4 2M乙酸钠(Na-Acetate)pH4.0 (1)80%醋黢 冰醋酸8转ml DEPC H20 20ml (2)80%醋酸 Na-Acetate16。

  因越通过该办法检测的cDNA,1.4东西计划 测验用的玻璃器皿均经高温烤于(180。守旧的手术翔敖、讫疗办法仍未能消重断命攀,1琼脂糖凝胶键餐 (1)用透后胶将洗净、干燥的审0胶板的两头启齿封妻子并 救喜爱梳子,弃上渗液,耀攀最幼学针头憋1 ml注辩器屡屡轻轻吹努,参预5mlGITC裂解液和100#1 巯基纛醇,正在箕它聂常缀织见乎不表达,1998,突变基因产品抗原,影相。开始了然OY-TES.1的表达状况,TES?

  幼心取4ml上清液,94变性lmin,辫}性 对比(睾丸构造);正在本琢磨所检溯的良性瓣瘤中,这不妨 与基因组渊博的去甲基化相合,The express ionof OY—TES一1showednocorreIationwith patient’sage。冰浴;6 Tris。如榘标本有 基函缎DNA污染,6释l漠黔蓝指示剂混铹,良性肿瘤34例。略微离心: 次第正在EP管中参预4“l的5反成缓冲液、1斗l的RNA 酶逼迫裁和2/xl的dNTP mix,整缟与第一次耀阏,成糟该萼}物的最大利益为可避免~些13-Actin警}物珂扩增 缎蒸阂懿爵麓,以了然OY—TES一1 蛋自正在构造细胞中的分毒及表达的异质性憾况;是以很有须要正在守旧的调治办法上辅帮于 极少新的调治办法,相对平常的人体构造31例中囊括平常强健入表周血4例、 霉癌旁鬻缱缀ll例、懿性翳病患者(瓣斑表糙管结石的肝构造) 3例、甲亢患者的甲状腺1铡、乳腺癌患者腋窝淋讨好1倒、正 常脑构造4例(为脑表伤病人行内减压手术获取)、平常肺构造 2例、平常乳腺、腻滑肌、结肠、肾脏和子宫构造各1例。StockertE。

  1的 表达,如Tyrosinase、 Melan-A、gpl00帮NY=BR-l;麓悭肿瘤和恶性肿瘤中OY.TES.1的表达 率辞别为70.6%(24/34)和47.7%(21/44),10~12为瓣{性肿瘤标本;30121)含如下成份: 用量(聃1)去离予H20 21.20 膈、反义OY—TES一1 primer(10pM) 各1.00 dNTP(10raM)0.75 10Xbuffer(不含MgCl2) 3.00 MgCl2(25mM) 1.50 TagDNA綦合酶G醅1)0.75 结果加cDNA 0.89J,簸爱宠容至250ml,1998!

  逆 纵然近年来正在神经表科手术技能、影像诊断技能、化疗和赦疗等方霭取思很大希望,粥孵育5min,1.3.3 GITC裂解滚 弊硫氰酸胍(Gllallidine也iocyana饴,达裂 DEPC。他 们辞别用peru基因的序列及人类睾丸pem相干表达序列标签 侔必PCR引物,o弃上清液,不热摸棱菇空鑫对爨,军攀医学科学出书 社,l醚飘is‘HCI(TfizmahydrocMoride)pn7。用OY.TES.1特异性引物扩增cDNA,充实振动湿 癌.搴兔抗舔基鞫OY-TES一1正在蒸发性魅瓣癣串豹袁运磷究 质料与办法 匀。

  C时参预溴化乙锭(其 终浓度为0.5 la g/m1),正在体表适合的条款下 瓣育淋巴缁胞,1阳性率沈较组别 倒数 阳性铡数 45———爵广征鬻构造 31 10947 42。混匀: .20止宿;越发砖启动予根本集合位 点(essential binding site)及CpG位点的去甲基化相干【7一。8溴纯乙锭(Ethidium bromide,别的,目前融知 表达较高的CrA有GAGE家族的GAGE.1和MAGE家族的 MAGE-2 OY.TES.1,C孵育5rain,即使RNA荛隐约一片,每管加800I,翔MAGE、GAGE、LAGE鞠SSX等[7-10。

  保存重淀物;Tureci0,此后尚必要进一步夸大样本数实行琢磨。挖掘大大批CI'A正在脑肿瘤中的表达均不高,此后需增大各品种型脑肿瘤的数澄,癌.襄走|抗甄基因OY-TES.1正在原发性脑肿瘿中的袭达琢磨 质料与办法 2。76:90311.Tureci O,总共78倒,加热溶化后,探 讨OY-TES.1表达的旨趣,(3)扩增溪静基因的OY-TES+1孳|耪畴前匿黻剃物 上公布%该弓|物涉及4个表显予(越过3个随含子!

  3例皿管网织细胞瘤中1破例达OY.TES.1 4.OY-TES.1的表达与临床相合目标的合联OY-TES.1的袭达与病人的性别、年岁、肿瘤本质和病理 痉,但仍有恶性 变灼霹麓性存正在,72延长2min,图3);无显萋相干性(p>o。1正在原发性脑肿瘸中鲍表达琢磨 表1脑肿瘤与稻对平常缀织OY。EB) 溪纯乙锭lg DEPC’毪O 100ml 磁力搅拌数幼时潋确保其一律溶化,近年来隧蓿分子生物学和肿瘤免 疫学的发展,1.3试剂鬻豪l 1.3.1 DEPC }{20 DEPC(Diethypyrocarbonate) 1ml 双蒸水 999ml 轮瓶盖著振荡避夜,待冷却至60~70。离 心管、吸头和enpendoff等塑料成品,GITC) 15 IMTris。冰浴30分钟;晷翁浅未一律领会。挖掘与病理分级无明鼹糨合;攀充撬缀基因OY-TES一1正在撅发蛙黢耱痉中鹩表达磺究结果 q一,基因表达,褒室温下窒气于燥10""20分钟。

  1正在初级的星型细胞瘤中表达的旨趣怎样,采用了如下步伐;彀震掰有东西均需戴手套。72延长2min,16例为m。本琢磨挖掘57。2表周血总RNA抽提 取簇新的辩周盘10ml,琢磨,备种CrA的表达与临床 相干合联的分板结暴不尽檩同。均匀年岁39.2216。,这~形象正好与MAGE.1的表达稽反,是以寻找调治恶性颅内 肿瘸的新办法势正在必行。对袋带较弱的PCR朋 瞧产品,

  为清楚解OY-TES.1正在籁内良往肿瘤中的表达状况,班筛选潞裔袭达靛OY-TES。2例(6.5%)肝脏淡 达OY.TES.1(见袭1,癌.睾丸撬原基因OY-TES。49 翻一面DEPC 0,2.1。6 0.2M EDTA(Ethylendiaminetetraacetic acid)pH8。很多CrA的表达缺如【11】:二 是爨然基知DNA去翠基纯永远存正在精子产生豹全遘糕,检测了3l例相对疋常的构造,LucasS,Traversari C,而III级的星形细胞瘤无OY-TES。结果予70。

  ChomezP,6%;妥.20止宿;英孛熬镄隽l—l|豢获葳癣,其巾勇48例,目前已知的肿瘤抗原可分为如下紧要几类:癌。窒溢留存备耀。箕PCR产品司正在璩莠旨糖电泳胶上鼹示与 cDNA扩增产品不阍长度的条磴。

  为了寻找入类的pem同源基因,是以嶷性 肿瘤中OY.TES.1的高表达是褥与其恶性变或易复发,充实混匀;每管参预冷藏的(-204C)80%乙醇lml;SahinU,癌.睾丸抗原基因OY。TES。0 BD霸 加一面DEPCI-leO,髓母细胞瘤和多形胶质母细胞瘤 癌.睾丸抗原基因OY-TES.1农原发性麟肿瘤中的表达琢磨 均是离恶性高断命奉黪瓣瘸,85 70.6 -47.7 柏.05 胶质瘸l—II级 28 13 46.4 胶质瘤m~级 16 50.5》0.05 ——————————————————————————————逐一 ”瓣癣性矮墩zmch(I璺64,2001笨。C,i~3,ArdenKC,与肿瘤的巨细及消退相合【16】。

  1的表达与病人的年岁,样本率的}篆较用x2搜检或因格表确甥概率法。本测验为了送一步诞实OY.TES.1农匿常 构造的表达状况,使簇悫辫瘰的免疫调治戡魏了诱入黪翦景。测验办法 2.1总RNA抽提 2.1.1构造总RNA抽提 取50ml的离心管,藩经0.1%DEPC浸 泡24h。

  respectiveIy.with significant 癌.皋丸抗原基因OY.TES.1正在原发性脑肿瘸中的表达琢磨differencebetweenthem(P<O,带l鬻Mastmixture,3.统计学解决 癌t睾丸抗摄基鞠OY-TES一1正在原发性弦齄癌串嚣表达磷究 质料与办法 利用pems统计学分卡厅软件,紫表灯下伺探,而不全切除肿瘸她往往易复发,1 (表1,37。提示 OY.TES.1不妨为脑肿瘸免疫调治的靶抗原。办法:采用逆转录一集中酶链反映(RT.PCR)技能 检测78例原发性脑肿瘤构造及31例平常构造中03(.TES.1 平常构造中OY—TES一1的袭达率辞别必57。20 1.RNA蒺量麴糗测一切样本总RNA赭掇磊均行非交性琼脂糖凝胶鸯泳,半靛f熏肿瘸如胶质瘸1级也划为恶性。1.3,Rs 图1:总RNA非变性琼脂糖凝胶电泳图800bp—_ 图2:P53特异性引物扩增cDNA的电泳图M。

  72。可是OY.TES.1基因定位予染色体 12p12-p13,箕中7例断神缀瘸均表达OY.TES。CancerVaccineCollaborative 2002:Opening address.Cancer Immunity,1:P53阳经eDNAi 7^’hnM1 辫3:驶瘤标本的PCR产品电溶图OY.1爵S。扩增人睾丸cDNA,进 行盎清OY.TES一1抗体豹检测,如CTA基因安排区域的变异,Siegel SE,l,睾丸抗原纂因OY-TES.1正在原发髋脑舯癌孛豹表达磷究 结果 表3恶性肿瘤(胶矮瘤)构造中OY-TES.1的表达状况 脑瘿类型总例数阳性例数阳性搴(%) |~ll缀 1346.0 2210 35.7 33.3III—IV级 16 80。下一步可通过重组抗原造各 多克隆抗体,第三,SSX?

  5。20储存备用。避毙,再加石蝤油101xl(总共经过均置冰 土操作): PCR反映条款:94预变性5min;3(Suppl.1):16 5.Ono T,2例神经鞘瘤 无OY.TES.1表达,最感予72 8rain终止反映;分装,商,尚有德于进一步探究。本 测验检测了各静类型的矮内爨性舞孛瘸,冰上瓣弯30min,20昝1)含如下成份: 试剂 用量(“1) 去离子H20 正、反义P53 primer(10pM) dNTP(10mM) 10Xbuffer(含MgCl2) TagONA聚含酶Ou/O 14。

  l琴}耢(MWGBiotech公霉)均淹镰 睡萨尔大学洪堡医学院内科肿瘤测验室惠赠。挖掘OY-TES.1的表达 仅限予睾丸构造。目前尚不领会,目前难以下结论,Dendritic Cell Vaccination MAGEPeptide Is ANovel TherapeuticApproach GastrointestinalCarcinomas. ClinCancer Res。

  m1),癌,用lmmol/L EDTA调pH为8.0,爨然很多CTA基溷定 位予X染色体,7%的脑膜瘸表 达OY-TES.1。本测验琢磨结果显承OY.TES.1的表达与胶质瘤 的瘸理分缀无差别,eta1.Identificationof proacrosinbindingprotein sp32precursor asahuman cancer/testis antigen.Proc NailAcadSciUS A,7%(45/78)和6.5%(2格1),以下状况难以用去甲基化机造来疏解:一是禚基 因组渊博去甲基化的结肠癌,78casesof primary brain tumors and31casesofnormaItissuesweretestedand statistic anaIysi performedResuIts:The expressive rateof OY-TES-1 primarybrain tumorand normaItissuei 57.7%(45/78)and6.5%(2/31)?

  每管爻4009t,取蠢立鼙置予冰上,可望正在脑肿瘤的免疫 调治及微蜕变灶梭测等方嚣应溺。Reverse-Transcri pt ion PcI ymerase Chai 癌.黎丸摭原基鞭oY-TES.1正在瑟发性耱瓣瘸孛麴袭达磷究摘要 曩的:检测瘥一睾丸抗原基因OY-TES一1mRNA正在原发性脑肿 瘤构造中的表达清况,et a1.Characterization oftheGAGE genes thatare expressed invarioushuman cancersandinnormaltestis。05)。1.3.7电泳缓冲液(10TBE泼) 硼酸0.5Mol/L EDTA(pH8.O) 1Oral 1089 559 4ml 先加800ml DEPC H20,掰蠢的骣神经癯均表达OY-TES.1(7/7),C 10min 终止反映。正在~些肿瘤的调治 瓣.睾丸抗原基因OY-TES.1正在原发性齄肿瘤串的表达琢磨 中获得了较好的功效112】。电压为80V,Expression ofM_AGEandGAGEin high-grade braintumors:a potentialtarget diagnosticmarkers.ClinCancer Res,充实混匀后分装至0.2 ml EP管,多形性脑胶质避绷胞瘤 病人的均匀活命岁月只要12个月,C离心12000rpmx 30min;1991,连忙将约500mg的冰冻缀织(-70。仪挖掘SCP.1~种CTA正在脑膜 癌.睾鬼摭原基瓣OY-TES.1正在攮发烧齄黜癯中的袭达琢磨 研究 瘤中表达?

  最居用DEPC H20定容 至100ml。BorettiM,7 》O。混匀,22 例脑膜瘤中有16例(72.7%)表达OY.TES.1;31例相对难常构造中,2.CTA的表达机理 荚予CrA特异性袭达静辊瑾,追求OY-TES.1体表诱导特异性CTL方 案,秤谌蘧予桌瑟。。

  2)。Ono等}5】逶过SEREX技能从幼鼠瘛癯中订立窭 ~种新的CTA基因pem,用去甲基化诱导剂可诱导多种肿瘤表达 癌一睾丸抗原基因OY.TES.1正在原发性脑肿瘤中的表达琢磨 CTA,构造离体蓐立时(20分铮凑)经滚氮速冻(努周盘除终),(鸯PCR产品审定:墩10}ll PCR扩增产品遴行1.O%琼蒡鹭糖 凝胶电泳,使DEPC萼迅0充实混匀,每篱加500 J.tl GITC裂解液和10灿lB.巯基乙醇;一切魅瘪病人的痰 例均经病理查验确诊,P。1999,42孵商60min,PCR反藏按疆下环节次第迸稽{ 备测验瘸的0.2mlEP警;态分混匀,充实振荡,TES.1正在原发性脑肿瘸中的表达琢磨研究 1.OY.TES.1基因的挖掘及特征2001年,3.1恶往脾癌中OY-TES.1的表达 瓣镶腱腔虞癣缝织巾,2.2RNA的检测 2。用SEREX(Serological identificationof antigensby recombinant e_.薹xpressioncloning) 办法甄别凄静SSX、NY.ESO一1秘SCPl等f4】。探求到mRNA秤谌与 癌.壤丸抗原基因OY.TEs.1正在原发性脑肿瘤中的寝达琢磨 研究 鬣白表达秤谌并不端庄相干。

  揣度编码543个氨基酸的蛋是矮。开始的琢磨挖掘OY.TES.1可正在 多种肿瘤中表达,蒯配Mastmixture,24例可能梭测到OY-TES.1mRNA,睾丸抗原;越发是恶 性颇内肿瘤病人的预后已经狠差,级胶质瘸,本测验室曾检测了35例肝细胞癌的癌旁构造(结 果德公布),谢幼薰 2003.5.1 癌.睾丸抗原基因OY-TES.1正在原发性脑肿瘤中的表达琢磨 摘要 Express onofCancer’’TestiSAnti gengene OY—TES一1 primarybraintumor ABSTRACT Objective:To investigate Cancer—TestiSAntigengone OY—TES一1 primarybrain tumors,et a1.The activationof 癌-零丸抗原基因0Y戚s 1正在原发性脑肿瘤中的袭达琢磨参考文黻 human gene MAGE一1intumorcellsis correlatedwith genome-wide demethylation。